核酸提取试剂盒

产品: 血液基因组提取试剂盒

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详细介绍

01/产品介绍

本试剂盒基于硅基磁珠特异性吸附DNA的原理,酶解法释放血液基因组,特定高效裂解缓冲体系中结合DNA分子,改变环境离子强度,从而实现基因组DNA分离纯化。可从100-250ul血液样本中高效提取基因组,获得的基因组DNA适用于PCR反应、酶切反应及Southern杂交等下游实验。

02/产品优势

  1. 无需酚或氯仿等有毒试剂

  2. 同时兼容新鲜,冷冻及抗凝血样本(EDTA抗凝、肝素抗凝及柠檬酸盐抗凝)

  3. 操作简便快捷,质量好

03/产品内容

04/保存条件

室温保存1年有效。

05/自备试剂

异丙醇,无水乙醇

06/质检实例

 

对以下样本进行DNA纯化: 200 μl EDTA、EDTANaF肝素钠、柠檬酸钠等不同处理的人抗凝血、2 ml血液分离出的白膜层、10 μl鸡血和200 μl鼠血,M: TIANGEN Marker D15000。 洗脱体积均为100 μl ,琼脂糖凝胶电泳上样量为4μl

实验结果分析: 本试剂盒具有广泛的样品适用性,可对不同处理的人抗凝血及不同物种的血 液进行高质量的 DNA 提取

07/注意事项

  1. 初次使用前,请向BufferW1和BufferW2中加入相应体积的无水乙醇。

  2. 每次使用前摇匀各瓶中溶液,使体系均一,保证提取效果。

  3. 溶液放置一段时间后若产生沉淀,可37℃水浴溶解,不影响效果。

  4. 使用无菌离心管和枪头,避免外源核酸酶污染。

  5. 血液样品反复冻融,会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。所得基因组DNA也应尽可能避免反复冻融,以免降解。如果提取冷冻血液的基因组DNA,建议37℃水浴,迅速解冻后再进行后续操作。

  6. 血液样品的储存:
    1)短期保存:已加入抗凝剂的血液样品可在2~8℃储存最多10天,对于某些实验例 如Southern杂交等,需要得到完整全长的基因组DNA,请将血液样品在2~8℃储存不超过3天,此时基因组DNA的降解程度较轻。
    2)长期保存:已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存(如果提取的是高分子量的DNA,推荐使用EDTA作为抗凝剂)

08/使用方法

1. 取100-250ul血液于1.5ml洁净离心管中。

2. 向其中加入300ul Buffer KA和20ul Proteinase K,漩涡混匀30s。

3. 68℃孵育(水浴和金属浴均可)10min,每间隔2-3min漩涡混匀5s。

4. 加入200ul异丙醇漩涡混匀20s,加入20ul磁珠悬液注意:加入前漩涡混匀磁珠悬液

5. 漩涡混匀30s min,静置1min。

6. 重复操作步骤5两次。

7. 转移离心管置于磁力架上,进行磁分离后,小心吸去液体注意:不要吸走磁珠

8. 从磁力架上取下离心管,加入800ul Buffer W1,漩涡混匀2min,进行磁分离,吸去除磁珠以外的液体注意:不要吸走磁珠

9. 重复操作步骤8一次。

10. 从磁力架上取下离心管,加入600ul Buffer W2,漩涡混匀2min,进行磁分离,吸去除磁珠以外的液体注意:不要吸走磁珠

11. 重复操作步骤10一次。

12. 转移离心管于磁力架上,室温晾干8-10min注意:晾干时间不可超过10分钟,否则会影响基因组质量

13. 取下离心管,加入100-200ul Buffer TE,用移液枪吹吸混匀20次,65℃孵育8 min,期间吹吸混匀2次。

14. 转移离心管置于磁力架上,进行磁分离,转移除磁珠以外的液体于新的离心管中,-20℃保存。

09/常见问题及应对策略

获得的基因组DNA纯度低

1. 建议增加Buffer W1和Buffer W2洗脱用量100ul

2. 选用新鲜血液样本进行提取。

3. 洗涤过程中,磁珠未被充分打散,有蛋白聚集,建议增加吹吸或漩涡混匀的力度和时间。

4. 用Buffer TE洗脱前未充分晾干,有少量乙醇残留。

获得的基因组DNA浓度低

1. 建议更换新鲜的样本进行提取。

2. 减少Buffer TE的用量,或延长65℃孵育时间至15min。

3. 洗脱过程中,磁珠未充分磁分离就转移液体,造成磁珠损失。

4. 加大磁珠10ul,以增加吸附力度,从而增大得率。

5. 晾干时间超过10分钟,磁珠太过于干燥,洗脱效率下降。

6. Buffer TE洗脱过程中未充分打散磁珠团块,造成基因组释放不充分。

提取过程中出现磁珠结团现象

在磁珠法提取过程中,由于大量染色质核酸吸附在磁珠表面,绝大多数情况下会出现磁珠结团的现象。此现象可作为核酸含量的判别指标,一般来说,有结团说明样本良好,吸附过程顺利高效,只要操作者在洗涤和洗脱过程中,充分打散团块就可得到理想的基因组DNA分子。




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