产品: 磁珠法NGS二代测序DNA片段分选试剂盒
编号:BK2021081229
CAS号:
价格: 询价
货号:BK2021081229
规格:
提示说明:纳米材料工艺和制备可能会有改变 所有纳米材料均支持按需定制 下单前联系客服确认产品详细信息。
详细介绍
【产品介绍】
NGSbead基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理 ,配合精心优化过的缓冲体系,用于二代测序文库构建过程中的DNA片段分选 、纯化。 本产品可适用于各品牌DNA 、RNA建库试剂盒,和目前广泛使用的AMPure XP Beads使用方式相同,片段回收效率和文库大小分布 均与 AMPure XP Beads高度吻合。
【保存方法及注意事项】
l 常温运输。 2-8℃保存 ,效期 一年 。避免冷冻避免冷冻 !
l 磁珠使用前 须在室温平衡至少30min。
l 80%乙醇需现用现配,否则将影响回收效率。
l 进行长度分选时,初始样品体积需≥100μL,不足时请用超纯水补齐。样品体积太小,将导致移液误差增大,进而影响分选的准确性 。
l 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
【文库大小分选参考条件】
用 NGSbead构建DNA文库。经过1×NGSbead纯化后,再按表1的条件进行分选,得到不同大小的文库,用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析。
表1. 磁珠文库分选推荐比例
插入片段平均长度(bp) |
250 |
250-350 |
350-450 |
450-550 |
550-650 |
650-750 |
第一轮体积比 |
0.80× |
0.70× |
0.60× |
0.55× |
0.50× |
0.45× |
第二轮体积比 |
0.20× |
0.20× |
0.20× |
0.15× |
0.15× |
0.15× |
注意:1.8x bead:所有片段纯化;1.0x bead :Primers + small amplicons去除;0.65x – 0.25x bead片段分选。
【试剂盒组成】
组分 |
100次 |
保存 |
PuriMag NGSbead |
5 ml |
2-8℃ |
Wash buffer |
80%乙醇(用户自备) |
常温 |
Elution buffer |
5 ml |
常温 |
图2. 磁珠法双轮分选流程图
【操作步骤】
1. 准备工作
将磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。
2. 双轮分选
1)请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀 。
2)根据要求,参考表1向DNA溶液中加入第一轮分选磁珠,涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。
3)室温孵育5min。
4)将离心管短暂离心并置于磁力架中 ,待溶液澄清后(约 5min),小心转移上清到干净的离心管中 。
注意:转移上清时,请勿吸取磁珠即使微量残留都将影响后续文库质量。
5)参考表1向上清中加入第二轮分选磁珠 。
6)涡旋混匀或移液器吹打10次混匀,室温静置 5min。
7)将离心管置于磁力架中,待溶液澄清后(约 5min),小心移除上清 。
8)保持EP管始终处于磁力架中,加入 200μl新鲜配制的 80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 s,小心移除上清 。
9)重复步骤 8。
10) 保持离心管始终处于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚出现龟裂(约 5min)。
注意 :切记磁珠不要干燥时间太久,磁珠干燥过度将影响纯化效果。
11 ) 将离心管从磁力架中取出,加入适量ddH2O(≥20 μL),涡旋振荡或使用移液器轻吹打充分混匀 。
12 ) 保持EP管始终处于磁力架中,小心吸取上清至干净EP管中,即完成分选。
温馨提示:北京北科新材科技有限供应产品仅用于科研,不能用于人体。部分网站示意图源自互联网,图片仅供参考,请以实际测试结果为准,如有侵权请联系我们立即删除。产品参数仅供参考,请以实际值为准! |
留言咨询 |
- 上一款: NAE-16核酸提取仪
- 下一款: 片段分选磁珠 NGSbead|NGS磁珠|二