核酸提取试剂盒

产品: 磁珠法NGS二代测序DNA片段分选试剂盒

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提示说明:纳米材料工艺和制备可能会有改变 所有纳米材料均支持按需定制 下单前联系客服确认产品详细信息。

详细介绍

产品介绍

NGSbead基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理 ,配合精心优化过的缓冲体系,用于二代测序文库构建过程中的DNA片段分选 、纯化。 本产品可适用于各品牌DNA 、RNA建库试剂盒,和目前广泛使用的AMPure XP Beads使用方式相同,片段回收效率和文库大小分布 均与 AMPure XP Beads高度吻合。


保存方法及注意事项

l 常温运输。 2-8℃保存 ,效期 一年 。避免冷冻避免冷冻 !

l 磁珠使用前 须在室温平衡至少30min。

l 80%乙醇需现用现配,否则将影响回收效率。

l 进行长度分选时,初始样品体积需≥100μL,不足时请用超纯水补齐。样品体积太小,将导致移液误差增大,进而影响分选的准确性 。

l 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


文库大小分选参考条件

用 NGSbead构建DNA文库。经过1×NGSbead纯化后,再按表1的条件进行分选,得到不同大小的文库,用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析。

表1. 磁珠文库分选推荐比例

插入片段平均长度(bp

250

250-350

350-450

450-550

550-650

650-750

第一轮体积比

0.80×

0.70×

0.60×

0.55×

0.50×

0.45×

第二轮体积比

0.20×

0.20×

0.20×

0.15×

0.15×

0.15×

注意:1.8x bead:所有片段纯化;1.0x bead :Primers + small amplicons去除;0.65x – 0.25x bead片段分选。


试剂盒组成

组分

100

保存

PuriMag NGSbead

5 ml

2-8℃

Wash buffer

80%乙醇(用户自备)

常温

Elution buffer

5 ml

常温



图2. 磁珠法双轮分选流程图

操作步骤


1. 准备工作

将磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。


2. 双轮分选

1)请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀 。

2)根据要求,参考表1向DNA溶液中加入第一轮分选磁珠,涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。

3)室温孵育5min。

4)将离心管短暂离心并置于磁力架中 ,待溶液澄清后(约 5min),小心转移上清到干净的离心管中 。

注意:转移上清时,请勿吸取磁珠即使微量残留都将影响后续文库质量

5)参考表1向上清中加入第二轮分选磁珠 。

6)涡旋混匀或移液器吹打10次混匀,室温静置 5min。

7)将离心管置于磁力架中,待溶液澄清后(约 5min),小心移除上清 。

8)保持EP管始终处于磁力架中,加入 200μl新鲜配制的 80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 s,小心移除上清 。

9)重复步骤 8。

10) 保持离心管始终处于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚出现龟裂(约 5min)。

注意 :切记磁珠不要干燥时间太久,磁珠干燥过度将影响纯化效果。

11 ) 将离心管从磁力架中取出,加入适量ddH2O(≥20 μL),涡旋振荡或使用移液器轻吹打充分混匀 。

12 ) 保持EP管始终处于磁力架中,小心吸取上清至干净EP管中,即完成分选。


提示:本试剂盒仅限科研用途。




温馨提示:北京北科新材科技有限供应产品仅用于科研,不能用于人体。部分网站示意图源自互联网,图片仅供参考,请以实际测试结果为准,如有侵权请联系我们立即删除。产品参数仅供参考,请以实际值为准!
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