通过双适体激活的近距离诱导微滴式数字PCR追踪肿瘤源性外泌体PD-L1蛋白

文章来源：北科新材浏览次数：3645时间：2021-06-08 QQ学术交流群：1092348845

肿瘤来源的外泌体蛋白已成为肿瘤诊断的重要生物标志物，但大量的正常细胞来源的外泌体阻碍了定量的准确性。厦门大学杨朝勇教授课题组建立了双靶点特异性核酸适配子识别激活的外膜原位连接系统，并结合微滴式数字PCR（ddPCR）技术对肿瘤来源的外泌体PD-L1（Exo-PD-L1）进行了定量检测。作者利用适配子的高亲和力、良好的识别选择性和ddPCR的高灵敏度特性，对肿瘤来源的Exo-PD-L1实现了高灵敏度和选择性。该策略可以区分癌症患者和健康献血者，首次被确定为比总Exo-PD-L1更可靠的肿瘤诊断标志物。总之，该示踪策略在将外泌体转化为可靠的临床指标和探索外泌体的生物学功能方面具有巨大的潜力。

图1. A375外泌体的特征和两个亲和探针的验证。A）两个亲和探针的连接部分示意图。用B）透射电子显微镜和C）纳米颗粒跟踪分析表征A375外泌体。D）流式细胞术分析MJ5C-L和SYL3C-L与A375外泌体的结合。

图2. PLA对PD-L1和EpCAM双阳性A375外泌体和PD-L1单阳性U251外泌体的验证。A）扩增的PLA连接产物的凝胶电泳分析。B）A375外泌体的ddPCR结果。C）流式细胞术分析抗U251外泌体的MJ5C-L和SYL3C-L探针。D）U251外泌体的ddPCR结果。

图3. 流式细胞术分析MJ5C-L和SYL3C-L对A）癌症患者和B）健康供者的外泌体的作用。C）癌症患者和健康献血者不同浓度外泌体的ddPCR结果热图。D）以适配体为基础的ddPCR超速离心洗涤定量Exo-PD-L1的流程图。E）癌症患者和健康献血者基于适体的免疫-ddPCR定量结果。

图4.（A）用ddPCR检测33例癌症患者和12例健康献血者外周血Exo-PD-L1。B）（A）的相应ROC曲线

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