核酸提取试剂盒

产品: 粪便核酸提取试剂盒

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详细介绍


01/产品介绍

本试剂盒基于硅基磁珠特异性吸附DNA的原理,化学法和酶解法联合释放粪便基因组,搭配特殊研制的缓冲体系,高效除去多糖类、脂类、酸类、消化酶类及胆红素等杂质,可从0.25-5g体积的粪便样本中稳定提取基因组DNA分子,获得的基因组DNA适用于常规PCR反应、qPCR反应、酶切反应及检测等下游实验。

02/产品优势

  1. 无需酚或氯仿等有毒试剂

  2. 兼容手动及高通量操作

  3. 操作简便快捷,质量稳定

03/产品内容

04/保存条件

室温保存1年有效。

05/自备试剂

异丙醇,无水乙醇

06/注意事项

  1. 初次使用前,请向Buffer FW2和Buffer FW3中加入相应体积的无水乙醇。

  2. 每次使用前摇匀各瓶中溶液,使体系均一,保证提取效果。

  3. 溶液放置一段时间后若产生沉淀(如Buffer KE Buffer KEG),可37℃水浴溶解,不影响效果。

  4. 使用无菌离心管和枪头,避免外源核酸酶污染。

  5. 如果单次粪便提取量大于0.5g,可按比例扩大体系加入量和洗脱量即可。

07/使用方法

1. 取0.25-0.5g粪便于2ml洁净离心管中。

2. 向其中加入500ul Buffer KE20ul Proteinase K,漩涡混匀30s。

3. 68℃孵育(水浴和金属浴均可)10min,每间隔2-3min漩涡混匀5s。

4. 12000rpm或13400g,室温离心3min,转移上清液于1.5ml离心管中,加300ul Buffer KEG

200ul异丙醇及20ul磁珠悬液注意:加入前漩涡混匀磁珠悬液

5. 漩涡混匀30s min,静置1min。

6. 重复操作步骤5两次。

7. 转移离心管置于磁力架上,进行磁分离后,小心吸去液体注意:不要吸走磁珠

8. 从磁力架上取下离心管,加入800ul Buffer FW1,漩涡混匀30s,室温静置1min, 进行磁分离,吸去除磁珠以外的液体注意:不要吸走磁珠

9. 从磁力架上取下离心管,加入800ul Buffer FW2,漩涡混匀30s,室温静置1min, 进行磁分离,吸去除磁珠以外的液体注意:不要吸走磁珠

10. 从磁力架上取下离心管,加入800ul Buffer FW3,漩涡混匀30s,室温静置1min, 进行磁分离,吸去除磁珠以外的液体注意:不要吸走磁珠

11. 重复操作步骤10一次。

12. 转移离心管于磁力架上,室温晾干8-10min注意:晾干时间不可超过10分钟,否则会影响基因组质量

13. 取下离心管,加入50-150ul Buffer FTE,漩涡混匀30s或用移液枪吹吸混匀20次,65℃孵育8 min,期间漩涡混匀5s或吹吸混匀2次。

14. 转移离心管置于磁力架上,进行磁分离,转移除磁珠以外的液体于新的离心管中,-20℃保存。

08/常见问题及应对策略

获得的基因组DNA纯度低

1. 建议增加Buffer FW1和Buffer FW2洗脱用量100ul

2. 选用新鲜粪便样本进行提取。

3. 洗涤过程中,磁珠未被充分打散,有蛋白聚集,建议增加吹吸或漩涡混匀的力度和时间或异丙醇用量由200ul减至100ul。

4. 提取样品量不合适,可适当放大或减少

5. 用Buffer FTE洗脱前未充分晾干,有少量乙醇残留。

获得的基因组DNA浓度低

1. 建议更换新鲜的样本进行提取。

2. 减少Buffer FTE的用量,或延长65℃孵育时间至15min。

3. 洗脱过程中,磁珠未充分磁分离就转移液体,造成磁珠损失。

4. 加大磁珠5ul,以增加吸附力度,从而增大得率。

5. 晾干时间超过10分钟,磁珠太过于干燥,洗脱效率下降。

6. Buffer TE洗脱过程中未充分打散磁珠团块,造成基因组释放不充分。

提取过程中出现磁珠结团现象

在磁珠法提取过程中,由于大量染色质核酸吸附在磁珠表面,绝大多数情况下会出现磁珠结团的现象。此现象可作为核酸含量的判别指标,一般来说,有结团说明样本良好,吸附过程顺利高效,只要操作者在洗涤和洗脱过程中,充分打散团块就可得到理想的基因组DNA分子。

 




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