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北科新材

游离DNA提取试剂盒

16399724942.pdf

编号：BK2021062310

CAS号：N/A

价格： 
￥4000


货号：BK2021062310-02

规格：

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详细介绍

01/产品介绍

游离 DNA 又称游离循环核酸，指循环血液中游离于细胞外的 DNA，这类 DNA 片段大小通

常不超过 800Bp，主要存在于血清及血浆中。游离 DNA 片段在疾病的早期诊断、预后、监

测等方面具有重要潜在价值。本试剂盒专为提取游离 DNA 而设计，基于硅基磁珠特异性吸

附 DNA 的原理，在各种提取组分中实现除杂和富集，得到纯净高质量游离 DNA 分子，适

用于 PCR 反应，qPCR 检测，二代测序（NGS）等下游分子操作。

02/产品优势

1. 普适性强，适用于新鲜或冷冻抗凝血清、血浆及无细胞体液样本提取

2. 性能稳定，提取过程无毒

3. 质量高，纯度好

04/保存条件

室温保存 1 年有效。

05/自备试剂

异丙醇，无水乙醇

06/注意事项

1．初次使用前，请向 BufferCW1 和 BufferCW2 中加入相应体积的无水乙醇。

2．每次使用前摇匀各瓶中溶液，使体系均一，保证提取效果。

3．样品应避免反复冻融（一般不超过 3 次），否则会降低提取质量。

4．样品短期可 4℃保存一周，-80℃长期保存。

5．溶液放置一段时间后若产生沉淀，可 37℃水浴溶解，不影响效果。

6．使用无菌离心管和枪头，避免外源核酸酶污染。

07/使用方法

1. 取 600ul 样品于 1.5ml 洁净离心管中。

2. 向其中加入 400ul Buffer KD 和 20ul Proteinase K，漩涡混匀 30s。

3.68℃孵育（水浴和金属浴均可）10min，每间隔2-3min漩涡混匀5s。

4.加入200ul异丙醇漩涡混匀20s，加入20ul磁珠悬液（注意：加入前漩涡混匀磁珠悬液）。

5.漩涡混匀30smin，静置1min。

6.重复操作步骤5两次。

7.转移离心管置于磁力架上，进行磁分离后，小心吸去液体（注意：不要吸走磁珠）。

8.从磁力架上取下离心管，加入800ulBufferCW1，漩涡混匀2min，进行磁分离，吸去除

磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。

9.重复操作步骤8一次。

10.从磁力架上取下离心管，加入600ulBufferCW2，漩涡混匀2min，进行磁分离，吸去除

磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。

11.重复操作步骤10一次。

12.转移离心管于磁力架上，室温晾干8-10min（注意：晾干时间不可超过10min，否则会

影响基因组质量）。

13.取下离心管，加入80-150ulBufferCTE，用移液枪吹吸混匀20次，65℃孵育8min，期

间吹吸混匀2次。

14.转移离心管置于磁力架上，进行磁分离，转移除磁珠以外的液体于一新的离心管中，

-20℃保存。

08/常见问题及应对策略

◆获得的基因组DNA纯度低

1.建议增加BufferCW1和BufferCW2洗脱用量100ul。

2.选用新鲜样本进行提取。

3.洗涤过程中，磁珠未被充分打散，有蛋白聚集，建议增加吹吸或漩涡混匀的力度和时间。

4.用BufferCTE洗脱前未充分晾干，有少量乙醇残留。

◆获得的基因组DNA浓度低

1.建议更换新鲜的样本进行提取。

2.减少BufferCTE的用量，或延长65℃孵育时间至15min。

3.洗脱过程中，磁珠未充分磁分离就转移液体，造成磁珠损失。

4.加大磁珠5-10ul，以增加吸附力度，从而增大得率。

5.晾干时间超过10min，磁珠太过于干燥，洗脱效率下降。

6.用BufferTE洗脱过程中未充分打散磁珠团块，造成基因组释放不充分。

◆提取过程中出现磁珠结团现象

在磁珠法提取过程中，由于大量染色质核酸吸附在磁珠表面，绝大多数情况下会出现磁珠结

团的现象。此现象可作为核酸含量的判别指标，一般来说，有结团说明样本良好，吸附过程

顺利高效，只要操作者在洗涤和洗脱过程中，充分打散团块就可得到理想的基因组DNA分

子。

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