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【产品介绍】
琼脂糖凝胶电泳是一种用于分离纯化DNA片段的重要分子生物学实验技术。磁珠法DNA胶回收试剂盒是苏州北科震泽生物科技有限公司最新研制的一种DNA胶回收试剂盒。本试剂盒中的试剂盒采用了独特的缓冲液溶解由TAE或TBE电泳缓冲液制备的琼脂糖凝胶块，从凝胶块中溶解的DNA片段可以特异性地吸附到硅基化磁珠的表面，在磁场的作用下，携带DNA的磁珠向磁铁方法进行定向移动和聚集，与剩余的其它杂质完全分开。通过简单的两次洗涤，可以将杂质完全洗尽。最后用水或低盐缓冲液将结合在磁珠上的DNA洗脱下来，洗脱下来的 DNA片段纯度高，完整性好，可直接用于连接反应、PCR 扩增、DNA测序等各种分子生物学实验。本试剂盒可以采用手工操作进行，也可以经对自动化提取设备进行参数调试后，用于自动化或半自动化的工作平台。
【特点】
l 磁珠之间吸附量差异极小，可重复性好。
l 可选择手动或自动操作方式。
l 操作简单，无需离心或过滤等耗时操作。
l 可实现高通量
【保存方法及注意事项】
请将试剂盒中的 Beads置于2-8℃保存，其余试剂室温保存，有效期详见包装。
l 严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对磁珠造成不可逆的损害。
l 磁珠长期放置后会聚集成团，从而使磁珠表面积减小，降低样品回收得率，使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠（通常需涡旋振荡20秒）。
【试剂盒组成】
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组分 |
100次 |
保存 |
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MG Buffer |
30 ml |
常温 |
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Wash buffer |
75%乙醇（用户自备） |
常温 |
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Elution buffer |
5 ml |
常温 |
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bead |
2 ml |
2-8℃ |
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异丙醇 |
用户自备 |
常温 |
DNA浓度及纯度检测 ：（1）得到的基因组DNA片段大小与样品保存时间、操作过程中剪切力等因素有关，所得DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度和纯度。 （2）DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260=1相当于大约50ng/ul双链DNA，40ng/ul单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7~1.9，如果洗脱时使用去离子水，比值会偏低，因为pH和离子会影响吸光度，并不表示纯度低。
【操作步骤】
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切胶→ |
1) 长波紫外灯照射下快速从琼脂糖凝胶中切下目的条带（尽量去除多余琼脂糖胶），称重后，将其放入干净的1.5 ml离心管中。
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溶胶→ |
2) 向胶块中加入1:1体积的MG buffer（体积：重量）（比如，100 mg的凝胶中加入100 μl的MG buffer。注：对于浓度大于2％的琼脂糖凝胶，向胶块中加入2:1体积的MG buffer）。将凝胶混合物在65 ℃条件下放置10 min，间或混匀直至胶块完全溶解。
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结合→ |
3) 向离心管中加入20 μl beads（磁珠摇匀后加入），移液枪吹打混匀后室温静置3 min，再吹打混匀1次，静置3 min。磁分离20 s，吸弃上清。
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清洗→ |
4) 向离心管中再加入步骤2同样体积的MG buffer，移液枪吹打混匀后室温静置3 min，于磁力架上磁分离20 s，吸弃上清。
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清洗→ |
5) 向离心管中加入700 ul Wash buffer，移液枪吹打混匀后室温静置2 min左右，置于磁力架上磁分离20 s，吸弃上清。重复该步骤一次。倒置离心管2-3 min，室温晾干5 min，让残留乙醇挥发干净，以免影响后续实验。
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洗脱→ |
6) 向离心管中加入10-50 ul Elution buffer（Elution buffer在65-70 ℃中预热后洗脱效果更好，减小洗脱体积或多次洗脱可增大DNA浓度），移液枪吹打混匀1-2 min，于磁力架上磁分离20 s，小心吸走上清液放入新离心管中，即为提取的质粒DNA，可存放于2-8 ℃，长期存放需放置于-20 ℃。 |
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